قامت الباحثة بثينة احمد محمود عيسى،   الطالبة في كلية الدراسات العليا بجامعة النجاح الوطنية، يوم الخميس الموافق 12/6/2014 بمناقشة اطروحة الماجستير بعنوان "العوامل الممرضة والمجموعات التطورية للبكتيريا الإشريكية القولونية لعزلات سريرية من الجهازالبولي في مستشفى ثابت-طولكرم، فلسطين".

البكتيريا الإشريكية القولونية هي واحدة من أكثر أنواع البكتيريا المسببة لإصابات الجهاز البولي بما في ذلك التهابات المثانة، الكلية، وغدة البروستات ،إن  أساس حدوث هذه الاضطرابات المميزة هو غير معروف والتي تظهر افتراضا من العدوى المموضعة (المحلية) في المثانة وغدة البروستات على التوالي ، وهذا المسبب المرضي مسجل في 50%-90% من كل إصابات الجهاز البولي غير المعقدة.

ان العلاقة بين العوامل الممرضة للبكتيريا الاشريكية القولونية والمجموعات التطورية ومقاومة المضادات الحيوية هي ظاهرة معقدة ولتوضيح في ما إذا كانت العوامل الممرضة ذات علاقة مباشرة بالمقاومة أو تعتمد على التوزيع التطوري. تهدف هذه الدراسة لتحليل المجموعات التطورية، والعوامل المسببة للمرض والمقاومة للمضادات البكتيرية في مجموعة من 50 عزلة من البكتيريا الاشريكية القولونية تم الحصول عليها من بول لحالات ربما تكون مصابة بإصابات في الجهاز البولي لمرضى مقيمين و غير مقيمين في المستشفى خلال الفترة ما بين شهر أيار و كانون الاول من عام 2012 م.

تم الكشف عن المجموعات التطورية وذلك باستخدام تقنية سلسلة تفاعل البلمرة المتعدد، أظهرت النتائج أن معظم العزلات التي تم دراستها وبشكل أساسي (36) عزلة (72%) تنتمي الى المجموعة  (D)، 13 عزلة (26%) تم تحديدها في المجموعة  (A)، بينما وجدت عزلة واحدة (2%) تنتمي للمجموعة (B1) ذات دلالة إحصائية (P < 0.001).

تم دراسة مقاومة عزلات بكتيريا الاشريكية القولونية بواسطة طريقة الانتشار القرصي. إن مقاومة المضادات تراوحت من 24% للجنتاميسين الى 100%  للاريثرومايسين والسيفازولين. وقد لوحظ 40 نمط لمقاومة العزلات للمضادات لبكتيرية المستخدمة، أظهرت هذة النتائج أن معدلات سجل النقاط لمقاومة المضادات كانت 8.4 و 6.5 لسلالات المجموعتين A وD على التوالي ذات دلالة إحصائية (P < 0.1). إن انتشار مقاومة المضادات التي تم اختبارها في كل سلالة تراوحت من 14.3%الى 100%. تم التوصل الى أن 61.5% (8/13) من العزلات المنتمية للمجموعة التطورية Aكانت مقاومة ل 5 أو أقل من المضادات الحيوية بينما 66.7% (24 من 36 ) من العزلات المنتمية للمجموعة التطورية D كانت مقاومة ل 6 أو أكثر من المضادات. أظهرت النتائج أن عنقودين كبيرين تعتمد على مقاومة/حساسية السلالات للفلوروكينولونات وليست على المجموعات التطورية . كما واظهرت ارتباط مقاومة ترايميثوبريم/سلفاميثوكسازول بالمجموعة  D التي كانت ذات فروق احصائية على P > 0.05 . بين السلالات الحساسة  للفلوروكينولونات والكينولونات كانت تكرارات مجموعاتA,D  25%(36/9) و 38.5%(5/13) على التوالي، في حين بين السلالات المقاومة كانت تكرارات مجموعات A,D 75.0%(27/36) و 61.5% (8/13) ،على التوالي .

  تمت دراسة الجينات الممرضة عن طريق تفاعل البلمرة المتعدد. أظهرت النتائج أن انتشار الجينات الممرضة تراوحت من 0% ل (papG allel1 ,hlyA) إلى 86% ل (fimH, traT) في السلالات التي تم فحصها. وكان انتشار الجينات الممرضة (utaA, iha, kpsMTII, usp, fyuA) 74%، 64%، 64%،  58%، و52%، على التوالي. وكان توزيع  fimH86.1% و84.6%في  مجموعات A,D على التوالي .إن انتشار الجينات التي تم اختبارها في كل سلالة تراوحت من 5.6% إلى 83.3%. أظهرت النتائج ان معدلات سجل النقاط للعوامل الممرضة للمجموعة D كان 8.2% وتراوح بين 2-15 بينما كان للمجموعة  A6.2 وتراوح بين 1-14 وكان  ذا دلالة إحصائية (P > 0.1). كما وأظهرت النتائج أن 69.2% (9/13) من السلالات كانت تنتمي للمجموعة التطورية  Aوحملت 6 أو أقل من العوامل الممرضة بينما 66.7% (24/36) من السلالات كانت  تنتمي للمجموعة التطورية D، وحملت 7 أو أكثر من العوامل الممرضة. كذلك أظهرت النتائج أن معدلات سجل النقاط للعوامل الممرضة من السلالات المقاومة للفلوروكينولونات أو\والكينولونات (7.3) لم تكن ذات دلالة احصائية  للسلالات الحساسة (8.1) لكل من الفلوروكينولونات والكينولونات على(P > 0.1 )إن السلالات الحساسة لكل من الفلوروكينولونات والكينولونات والمتعلقة بالمجموعة التطورية  D أظهرت ارتفاعا مهما في انتشار الجين الممرض iroN أكثر من المقاومة. (P > 0.1) بينما في المجموعة التطورية A ارتفع انتشار papG2 وانخفض انتشار  fimH للسلالات الحساسة لكل من الفلوروكينولونات والكينولونات على داله احصائية (P > 0.1) .بالمقارنة بين السلالات المقاومة والحساسة لكل من الفلوروكينولونات والكينولونات بغض النظر عن المجموعات التطورية أظهرت السلالات الحساسة ارتفاعا مهما في الجين الممرض  ompTعلى داله احصائية( P > 0.1). يبدو انه ليس هناك عامل ممرض واحد أو نمط محدد لالتهاب المسالك البولية. بشكل عام إن السلالات التي تنتمي للمجموعة التطورية   Dأظهرت انتشاراً أعلى للعوامل الممرضة بالرغم من أن الارتباط بين  kpsMtII, sat, traTومجموعة D كان ذا دالة احصائية (P > 0.1). أظهرت النتائج أن 3 عناقيد كبيرة تعتمد على وجود/غياب العوامل الممرضة  cnf1و afa/dra  وليست على المجموعات التطورية. تم التوصل أيضا الى ان جين  traTكان الاكثر انتشاراً بين السلالات المقاومة لحمض الناليديكسيك، الفلوروكينولونات وترايميثوبريم/السلفاميثوكسازول وكان 90.1% (30/33) و95.8% (23/24) و90.6% (29/32)، على التوالي .

وفي النهاية اظهر التحليل الجزيئي ل 50 عزلة بكتيريا اشريكية قولونية بولية انتشاراً واسعاً للمجموعات التطورية D معدلات سجل النقاط للعوامل الممرضة ولمقاومة المضادات مرتفعة أكثر من المجموعة .Aإن إصابات الجهاز البولي الناتجة عن هذه  السلالات تمثل مشكلة سريرية بسبب الخيارات العلاجية المحدودة . بالإضافة إلى ذلك، مزيد من التحليل يجب إجراؤه خاصة داخل الكائن الحي للكشف عن أهمية وتأثير العوامل الممرضة بخصوص الأعراض السريرية.

وتكونت لجنة المناقشة من د. غالب عدوان مشرفاً ورئيساً، و د. حاتم عيدة ممتحناً خارجياً من جامعة القدس/ابو ديس، و د. معتصم المصري ممتحناً داخلياً، وفي ختام المناقشة أوصت اللجنة بنجاح الطالبة ومنحها درجة الماجستير بعد اجراء التعديلات.